以萨摩、长州、土佐藩兵为主体的新政府军继续向东进发，直逼江户。近藤勇率领由新选组队士改组成的“甲阳镇抚队”，前往甲州（现山梨县）狙击新政府军，伤口刚刚愈合的斋藤一也在其中。甲阳镇抚队在西进路上耗时太久，已然失了先机。板垣退助所率领的新政府军又是全副洋式装备，队士手中武士刀和长枪越发显得笨拙可笑。而且，甲阳镇抚队仅有不足200人，而板垣退助有1，200军士。甫一开战，甲阳镇抚队便已伤亡百人。近藤勇带领残兵退往下总国流山村（现千叶县流山市），不久被新政府军包围，近藤勇被捕，一路押往江户受审。斋藤一率部分队士突围，他见旧主松平容保已回到本藩，便决意继续效忠，与新政府军对抗到底。斋藤一等人一路北上，来到会津坚持抗战。

土方岁三赶往江户，他想尽了各种办法，试图保全近藤勇的性命。但是，昔日幕臣们各怀鬼胎，没人在意早已成为弃子的新选组死活。4月25日，曾为幕府出生入死的近藤勇于板桥刑场执行斩首刑，土方岁三痛失多年的同志。与新政府结下了血海深仇的土方岁三率领部分队士前往会津，与斋藤一再次相会。

土方岁三在宇都宫城战役中脚部受伤，行动不便。斋藤一被任命为会津新选组组长，带领队士们与会津藩兵一起战斗。可是，会津战士们再英勇，却也抵挡不住武器精良、人数众多的新政府军。进入8月，新政府军在会津盆地长驱直入，若松城已是风中之烛。土方岁三见会津藩必败，决心继续北上作战。他与步兵奉行大鸟圭介所率领的旧幕府军联合，准备前往仙台方向。斋藤一不愿同行，他一针见血地说：“会津危在旦夕，此时离开，是为不诚不义。”土方岁三本来脾气暴躁，被斋藤一当面指责，也只能低头不语。于是，斋藤一与土方岁三分道扬镳，带着14名队士留在了会津。

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