火烧比叡山后，不光佛门弟子，举国上至朝廷命官、下到庶民百姓都为之震撼恐慌。世人第一次真正意义上感受到信长的恐怖、残虐、毒辣、野蛮。日本诸山从此视信长为佛门公敌，同信长反对派之间的大团结关系变得更加紧密。

同年十月三日，武田信玄借北条氏康病逝之机，同其子氏政缔结同盟关系。桶狭间之战后，失去义元的今川家族迅速走向衰亡—领国骏河亦被信玄夺占，远江则划入了家康的统治范围内。

和北条结盟后，信玄彻底打消了后顾之忧，开始将触手伸到远江一带。远江此时已完全属于家康的领地内，元龟三年（1572年）十二月二十二日，双方在滨松北部三方原附近爆发激烈的冲突。

是役，家康主力和随后赶来的织田援军皆惨遭武田骑军兵团的蹂躏。这是自桶狭间之战以来，事业一帆风顺、势力日益强大的家康第一次遭遇到体无完肤的惨败。

但此战惨败的结果，也使信长从中充分吸取了教训，他开始洞察武田军的军法战略，为三年后的长筱大捷打下了坚定的基础。

同割据今川领地的家康势如水火的同时，信玄也对企图独霸天下、势力日渐扩张的信长表现出明显的敌意。

信玄结盟北条，赤裸裸地暴露出挺进中原的真实意图，对信长已形成极大威胁。信长之所以肯派遣军队支援家康，也是欲图借助三方原大战，一举将信玄军全部歼灭。

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